2025-09-12 01:08:06
试剂兼容性:选择与常用试剂品牌兼容性好的仪器,避免因试剂与仪器不匹配而导致实验结果不稳定或无法进行。一些仪器厂家会提供配套的试剂,以保证实验的比较好效果,如罗氏的荧光定量 PCR 仪与罗氏的 TaqMan 试剂配合使用,能发挥良好的性能。软件功能:功能强大的软件应具备实时监测、数据分析、结果可视化等功能,并且操作界面友好,易于上手。例如,仪器软件能够自动进行基线校正、阈值设定,还能进行基因表达差异分析、SNP 分型结果分析等。售后服务:考虑仪器制造商的售后服务质量,包括技术支持、维修保养、培训服务等。良好的售后服务可以帮助用户解决在使用过程中遇到的问题,确保仪器的正常运行。判断食品是否含有转基因成分以及转基因成分的含量,保障消费者的知情权和选择权。南京96孔荧光定量PCR仪一般多少钱
荧光标记探针法原理:使用一种特异性的荧光标记探针,它能与目标 DNA 序列杂交。探针的 5' 端标记有荧光报告基团,3' 端标记有荧光淬灭基团。在游离状态下,报告基团发出的荧光会被淬灭基团吸收,无法检测到荧光信号。当 PCR 反应进行时,DNA 聚合酶在延伸引物的过程中,会将探针水解,使报告基团与淬灭基团分离,报告基团发出的荧光信号就可以被仪器检测到。每扩增一条 DNA 链,就会有一个探针被水解,释放出一个荧光信号,荧光信号的强度与 PCR 产物的数量成正比。过程:在 PCR 反应的退火阶段,荧光标记探针会与目标 DNA 序列特异性结合。在延伸阶段,DNA 聚合酶的 5' - 3' 外切酶活性会将探针从 5' 端开始逐个水解,使报告基团游离出来,产生荧光信号。仪器会在每个循环的延伸阶段检测荧光信号的强度,随着 PCR 反应的进行,荧光信号逐渐增强,同样可以得到 Ct 值。定量依据:与荧光染料法类似,通过标准品建立标准曲线,根据待测样本的 Ct 值在标准曲线上计算出起始模板量。由于荧光标记探针具有特异性,能与特定的目标序列杂交,因此可以更准确地对目标基因进行定量分析,减少非特异性扩增的干扰。南京Cy5.5荧光定量PCR仪直销价若温度控制不准确,会导致 PCR 反应效率降低、特异性下降,产生非特异性扩增,影响荧光信号准确性;
VIC与 FAM 类似,是一种荧光报告基团,可标记在引物或探针上用于荧光定量 PCR。它在 PCR 过程中,随着引物或探针与目标 DNA 的结合以及 PCR 产物的扩增,会发出特定波长的荧光,其荧光信号强度与 PCR 产物的量成正比,通过检测荧光信号的变化来实现对目标 DNA 的定量分析。特点:激发波长和发射波长与 FAM 有所不同,激发波长约为 538nm,发射波长约为 554nm,荧光颜色为黄绿色。VIC 常用于多重荧光定量 PCR 中,可与 FAM 等其他荧光染料同时使用,实现对多个不同目标基因的同时检测,因为其光谱特性与其他染料有较好的区分度,能避免荧光信号之间的相互干扰。
FAM并不是一种特定的荧光定量PCR仪品牌或型号,而是一种在荧光定量PCR中常用的荧光染料。FAM(Fluoresceinamidite)即羧基荧光素,具有高量子产率,在被特定波长的光激发后会发出强烈的绿色荧光,其激发波长通常在495nm左右,发射波长在520nm左右。由于其荧光特性稳定且灵敏,被广泛应用于荧光定量PCR实验中,作为报告分子来对目标DNA或RNA进行定量检测。很多荧光定量PCR仪都可以使用FAM染料进行检测,例如赛默飞世尔的QuantStudio系列、ABIStepOnePlus等。这些仪器通常配备有能激发FAM染料发光的光源以及能检测其发射荧光的光学系统。以QuantStudio?1Plus实时荧光定量PCR仪为例,它配备4种常用的激发和发射滤光片,包括FAM、VIC、ROX和Cy5,其激发光源为白光LED,激发范围为455至530nm,可满足FAM染料的激发需求。染料的纯度、荧光量子产率及与核酸的结合特性等很重要。
以下是一些判断荧光定量 PCR 仪光路系统是否需要校准的方法:熔解曲线异常峰形改变:熔解曲线的峰形变得不规则、宽化或出现多个峰,而样品和实验条件均无变化时,可能是光路系统对荧光信号的检测精度下降,导致熔解曲线的分析结果不准确,此时需要考虑对光路系统进行校准。Tm 值偏移:熔解曲线的 Tm 值(解链温度)与预期值相比出现明显偏移,且排除了引物设计、反应条件等因素的影响,可能是光路系统的荧光检测存在误差,影响了对 DNA 双链解链过程的准确监测,需要对光路进行检查和校准。核酸完整性:完整的核酸才能保证 PCR 反应正常进行。南京JOE荧光定量PCR仪
与核酸结合特异性强、稳定性好的染料,可减少非特异性信号干扰。南京96孔荧光定量PCR仪一般多少钱
荧光定量PCR仪的检测结果会受到多种因素的影响,包括仪器设备、试剂质量、样本处理以及实验操作等方面,以下是具体介绍:仪器设备因素热循环系统:热循环的准确性和均匀性至关重要。如果热循环过程中温度控制不准确,如实际温度与设定温度存在偏差,会导致PCR反应效率不稳定,影响扩增产物的产量和质量,进而使检测结果不准确。不均匀的温度分布会使不同反应孔之间的扩增效果产生差异,增加实验误差。荧光检测系统:荧光检测的灵敏度和准确性直接影响结果。仪器的光学部件性能不佳,如激发光源强度不足、荧光信号收集效率低,可能导致弱荧光信号无法被准确检测到,影响对低拷贝数模板的定量分析。此外,荧光检测通道之间的串扰也会干扰信号的准确测量,造成结果偏差。南京96孔荧光定量PCR仪一般多少钱